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產(chǎn)品名稱 | 非小細胞肺癌細胞；H125 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63454 |
細胞名稱 非小細胞肺癌細胞；H125
形態(tài)特性: 上皮樣細胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況:
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細胞用消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。
rpTNF-a, CF (25 UG)細胞名稱:
酚試劑(甲基-2-并噻唑啉酮腙鹽酸鹽)ROR1 Antibody2-溴呋喃
米格列ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjuga)2-異甲酯
米格列(標準品)Ku70 (D35) Antibody甲基酸叔丁酯
1-萘Ku70 (V540) Antibody叔丁基酚
鹽酸達泊西汀(混旋)ROR2 Antibody2,4,6-三氟甲
鹽酸達泊西汀(右旋)CDK8 (P455) AntibodyD(+)-2-氨基-1-丁
沃替西汀鹽(LuAA21004)CDK8 (P455) Antibody2-氨基丁
異櫻花素;異櫻花亭(標準品)HSL Antibody酰基甲酸
固黑K鹽HSL Antibody癸基十四
氨基黑10BLC3A/B Antibody鄰基肼鹽酸鹽
固黑K半化鋅鹽CD45 (30-F11) Rat mAb (APC Conjuga)D-甲酯鹽酸鹽
鹽酸納曲酮MICAL1 (D8K7R) Rabbit mAb1-甲氧基-2-酮
N,N-二甲酰(DMF)Cyclin B1 (V152) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)7-溴異喹啉
三胂氧化物Phospho-Stat3 (Tyr705) (M9C6) Mouse mAbD-
5,7,4'-三羥基-8-甲基二氫黃酮(標準品)CDCP1 Antibody氨基-1-哌啶甲酸酯
蘆薈苷B(標準品)Bub1b Antibody2--氨基-5-溴吡啶
二甲青FFSNAP25 (A195) Antibody(氧代基)氨酸叔丁酯
牛蒡子苷元-4'-O-β-龍膽二糖苷(標準品)Cyclin B1 (V152) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)5--2-戊酮
羅漢松樹脂酚-4'-O-β-龍膽二糖苷(標準品)BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)溴基肼
石蕊Microcephalin-1/BRIT1 (D38G5) Rabbit mAb對二甲
7-O-甲基蘆薈新甙A(標準品)Microcephalin-1/BRIT1 (D38G5) Rabbit mAb溴
肉蓯蓉苷A(標準品)Beclin-1 (2A4) Mouse mAb羥酸
蘆薈新甙D(標準品)TIF1β Antibody(S)-哌啶甲酸
苦玄參苷IV(標準品)TIF1β Antibody羥基-2-丁酮
瓜子金皂苷XXXI(對照品)TIF1β (C42G12) Rabbit mAb2-丁炔酸
俾斯麥棕RTIF1β (C42G12) Rabbit mAb2-溴-氟甲
俾斯麥棕YSLK Antibody基鋰
偶氮膦ITLK1 Antibody氨基嘧啶
（標準品）Siglec-10 (D4E3Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)5-氨基嘧啶
茜素Phospho-HSL (Ser660) Antibody戊酸
姜黃素Phospho-TIF1β (Ser824) Antibody酸酯
姜黃素（標準品）Phospho-TIF1β (Ser824) AntibodyD-吡喃葡萄糖
姜黃素（高純）Ape1 Antibody1,環(huán)已二酮
熒光素Cyclin E1 (HE12) Mouse mAb
鈣黃綠素Cyclin E1 (HE12) Mouse mAb2-羥基喹啉
瑞氏色素Phospho-Cyclin B1 (Ser147) Antibody(S)-2-甲基吡咯烷
細胞；HFL1 F12K優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
非小細胞肺癌細胞；H125人丙氨(LPA)ELISA試劑盒LNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人膽(Cholicacid)ELISA試劑盒LNELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人對氨基甲(PABA)ELISA試劑盒LNELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人對氧磷酶(PON)ELISA試劑盒LPAb-IgAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人芳基硫酯酶A(ASA)ELISA試劑盒LPAb-IgGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人甘膽(CG)ELISA試劑盒LPAb-IgMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒LPAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人核糖核酶(RNASE)ELISA試劑盒LPAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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