公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
| 產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
| SV40T轉(zhuǎn)化的胚腎細(xì)胞；293T | 貼壁生長 | EY-X63210 |
細(xì)胞名稱 SV40T轉(zhuǎn)化的胚腎細(xì)胞；293T
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 表達(dá)SV40大T抗原，可用于轉(zhuǎn)染和作為包裝細(xì)胞；用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染時(shí)可高表達(dá)AP融合蛋白。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:4~8傳代；26~36小時(shí)1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Anti-Apo-E 載脂蛋白E抗體 0.1ml
Anti-APP695/770 淀粉樣肽前體蛋白抗體 0.1ml
Anti-AQP-2 水通道蛋白-2抗體 0.1ml
Anti-AQP-3 水通道蛋白-3抗體 0.1ml
Anti-AQP4 水通道蛋白-4抗體 0.1ml
Anti-AR 雄激素受體抗體 0.1ml
Anti-ARC ARC抗體 0.2ml
Anti-ARF6 ADP核糖基化因子6抗體 0.2ml
Anti-Aromatase P450 芳香化酶/細(xì)胞色素P450/P450抗體 0.1ml
anti-ARIP2a 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體 0.1ml
anti-β-arrestin 1/2 β-抑制蛋白1/2抗體 0.1ml
anti-ARIP2B 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體 0.2ml
Anti-ART 膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF的一種抗體 0.1ml
Anti-ARα1 α1腎上腺素能受體抗體 0.1ml
Anti-ASCL1/MASH1 神經(jīng)母細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)移因子抗體 0.1ml
anti-ASPP1 p53凋亡刺激蛋白1抗體 0.1ml
anti-ASPP2 P53凋亡刺激蛋白2 0.1ml
Anti-AT/AGT 血管緊張素原抗體 0.1ml
Anti-AT1R 血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體 0.2ml
Anti-ATF1 活化復(fù)制因子1抗體 0.1ml
Anti-ATF2 活化復(fù)制因子2抗體 0.2ml
Anti-ATF3 活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.2ml
Anti-B7-H1/PDL1/CD274 程序性死亡配體1抗體 0.1ml
Anti-B7-H4 B7H4抗體 0.2ml
Anti-BACE/ASP2 β分泌酶抗體 0.1ml
Anti-Bad 相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體 0.1ml
anti-Bak Bcl-2同源拮抗劑Bak抗體 0.1ml
Anti-BADH2 BADH2抗體 0.1ml
人(TP-5)elisa試劑盒 Human Thymopentin, TP-5 Elisa Kit 96T/48T
人(Thymosin)elisa試劑盒 Human Thymosin Elisa Kit 96T/48T
人未磷酸化類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1elisa試劑盒 Human Non-Phosphorylated Insulin-like growth factor binding protein 1 Elisa Kit 96T/48T
人甲狀旁腺激素樣蛋白(PLP)elisa試劑盒 Human parathyroid hormone-like protein, PLP Elisa Kit 96T/48T
人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)elisa試劑盒 Human visfatin Elisa Kit 96T/48T
人apelin 12(AP12)ELISA Ki Human apelin 12, AP12 Elisa Kit 96T/48T
人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)elisa試劑盒 Human Glucose dependent insulin releasing polypeptide, GIP Elisa Kit 96T/48T
人胰島素原(PI)elisa試劑盒 Human Proinsulin, PI Elisa Kit 96T/48T
人胰島素受體β(ISR-β)elisa試劑盒 Human Insulin Receptor β, ISR-β Elisa Kit 96T/48T
人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)elisa試劑盒 Human Glycated hemoglobin A1c, GHbA1c Elisa Kit 96T/48T
人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)elisa試劑盒 Human ghcagons-like pepfide 1, GLP-1 Elisa Kit 96T/48T
人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)elisa試劑盒 human thyroid stimulating immunoglobulin, TSI Elisa Kit 96T/48T
人甲狀旁腺激素(PTH)elisa試劑盒 human Parathyroid hormone, PTH Elisa Kit 96T/48T
人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)elisa試劑盒 human Prostaglandin D2-methoxime, PGD2-MOX Elisa Kit 96T/48T
人高敏甲狀腺素(u-T4)elisa試劑盒 human Ultrasensitivity Thyroxine, u-T4 Elisa Kit 96T/48T
SV40T轉(zhuǎn)化的胚腎細(xì)胞；293T人高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)elisa試劑盒 human ultrasensitive thyroid-stimulating hormone, U-TSH Elisa Kit 96T/48T
人多巴胺(DA)elisa試劑盒 human dopamine, DA Elisa Kit 96T/48T
人(AZT)elisa試劑盒 human Azidothymidine, AZT Elisa Kit 96T/48T
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
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